小沐同学（AI）|单细胞测序100问(47)

Q：流式细胞分选基于什么原理对细胞进行分选？

A：

流式细胞分选（FACS）是在流式细胞术检测细胞表型的基础上，使用充电分选技术以实现多种特定表型细胞的分离，适用于分离单一细胞或特定亚群细胞，通常是在细胞表面标记有特定抗体或荧光染料的细胞。具有分选参数多、群体多、纯度高、灵活性强等优势。分选后细胞可做进一步分子生物学研究如荧光定量PCR、WB、细胞培养等。

注意事项：确保标记的抗体或染料与研究亚群的特异性相匹配。

分选型流式细胞仪一般由液流系统、光路系统、检测分析系统和分选系统4部分组成。分选功能是通过鞘液流形成的含有细胞的带电液滴而实现的，在流动室的喷嘴上装有一个高速振荡器，该装置充电后以每秒几万次的振动频率使鞘液流成为上万个液滴，细胞在进入液滴之前已经被测定，如果其特性与被选定要进行分选的细胞特性相符，则仪器会对此细胞形成液滴时给整个液柱充以指定的电荷（对标有荧光素的细胞液滴带以负电荷；未标记荧光素的细胞液滴带以正电荷；而不含有细胞的液滴则不被带电荷）。这样，当被选定的细胞形成液滴时就带有特定的电荷，未被选定的细胞和空白液滴不被充电，即不带电荷。当充以不同电荷的含细胞的鞘液流经带有正负几千伏恒定电场的偏转板时，就根据自身所带的电荷性质产生偏差而落入各自的收集管中，不带电荷的液滴就进入废液槽中，从而实现细胞分选的目的。

操作流程

• 先制备单细胞悬液（可检测多种样本的单细胞悬液：外周血、骨髓、细胞穿刺液、洗脱液、实体组织、培养细胞等，如果是无菌实验应该注意无菌操作）

• 样本染色：调节电压与选取目的细胞群（分选前应该做一个预实验，优化仪器的测定条件，建立分选门）

• 细胞分选与收集