m6A是一种常见的RNA甲基化修饰,指的是在RNA分子中的腺嘌呤(adenine)上添加一个甲基基团。这种修饰在许多不同的RNA分子上都存在,包括mRNA、长非编码RNA和小核RNA。m6A-seq技术利用高通量测序技术来鉴定RNA分子中的m6A修饰位点。通常,该技术涉及将RNA分子转录为cDNA,然后通过化学或酶法将m6A修饰的核苷酸与未修饰的核苷酸区分开来。接着,通过高通量测序分析这些cDNA片段,可以确定m6A修饰的位点以及其相对丰度。
通过特异识别m6A修饰的抗体,对细胞内具有m6A修饰的RNA片段进行免疫共沉淀。对沉淀下来的RNA片段进行高通量测序,结合生物信息学分析,即可在全基因组范围内对m6A修饰的状况进行系统研究。
1.原始数据质量评估
2.与参考基因组比对分析
3.甲基化位点检测分析:甲基化序列类型统计,甲基化位点motifs识别
4.全基因组甲基化图谱:甲基化在基因组、功能区域、基因上下游的分布
5.差异甲基化区域检测、注释
6.差异甲基化基因功能注释
1)基因表达调控机制:m6A修饰在基因转录后的RNA分子上发挥重要作用,影响其稳定性、转运、翻译和降解。研究人员可以通过分析m6A修饰的位点和丰度,揭示这种修饰在基因表达调控中的机制,包括对转录因子结合、翻译启动和RNA降解的影响。
2)细胞分化和发育:m6A修饰在细胞分化和发育过程中发挥重要作用。研究人员可以通过比较不同细胞类型和发育阶段中的m6A修饰模式,揭示这些修饰如何调控细胞命运决定和组织特异性表达。
3)肿瘤生物学:在肿瘤中,m6A修饰的异常变化与肿瘤发生、进展和治疗抵抗有关。研究人员可以通过分析肿瘤细胞中的m6A修饰,发现与肿瘤相关的靶基因、通路以及潜在的治疗靶点。
4)神经系统疾病:m6A修饰在神经系统发育和功能中扮演重要角色。研究人员可以通过分析神经系统疾病模型中的m6A修饰,揭示这种修饰与神经退行性疾病(如阿尔茨海默病和帕金森病)之间的关系。
5)免疫学:m6A修饰在免疫调节中也具有重要作用,影响免疫细胞的分化和功能。研究人员可以通过分析免疫细胞中的m6A修饰,揭示其在免疫应答和炎症调节中的作用机制。
6)药物开发:鉴于m6A修饰在多种疾病中的重要作用,研究人员可以探索利用m6A修饰作为潜在的药物靶点。针对m6A修饰调控通路的干预可能有助于开发新的治疗策略。
样本投入量低、测序质量高、周期短、适用多种样本
Motif分析
Peak density图
m6A 峰在不同染色体中的分布
火山图
热图
GO功能富集分析
雷达图
小提琴图
Unique features of the m6A methylome in Arabidopsis thaliana(luo et al, 2014, Nat Commun, IF=16.6)
m6A-seq揭示拟南芥RNA甲基化独特特性
作者绘制出了两种拟南芥中的m6A全转录组图谱,揭示了m6A在植物mRNA中独特且高度保守的修饰形式。不同于哺乳动物中的m6A修饰,拟南芥中m6A不仅在终止密码子和3' UTR内富集,在起始密码子的周围也存在大量的m6A修饰。GO功能富集分析表明m6A在拟南芥的独特分布和与叶绿体相关的一些植物特异性信号通路有关联。此外,作者还发现了m6A修饰水平和mRNA转录水平之间存在正相关关系,表明m6A对植物基因的表达起重要的调控作用
拟南芥 m6A 甲基化概述
送样类型 | 送样量 | 备注 |
细胞 | ≥5*107 | 无支原体污染 |
动物组织 | ≥300mg | |
植物组织 | ≥300mg |
送样类型 | 送样量 | 完整性(RIN值) | 浓度 | 纯度 |
Total RNA | ≥200μg | ≥7 | ≥100ng/μL | 无DNA,蛋白/盐离子等污染 |
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