小沐同学（AI）|单细胞测序100问(49)

Q：免疫磁性分选策略

A：免疫磁珠细胞分选依据可以分为两类。一类是根据所标记细胞的不同分为阳性分选和阴性分选；另一类是根据分选方法不同分为直接分选法和间接分选法。

（1）依据标记细胞的不同分类：

• 阳性分选：将目的细胞相对应的特异性抗体与磁珠相连，抗原抗体发生特异性结合后，以磁分离的方式将目的细胞分离出来，回收率高，适合富集低比例细胞。

• 阴性分选：将非目的细胞磁性标记后，从总细胞中去除。即未磁性标记的细胞为目的细胞。这种方式目的细胞不与抗体结合，适合于缺乏针对目的细胞的特异性抗体的情况（某些稀有标志）。但在靶细胞的细胞数所占比例比较小时，分选过程中存在的非特异性吸附会直接导致目的细胞的损失。

• 阴性分选：将非目的细胞磁性标记后，从总细胞中去除。即未磁性标记的细胞为目的细胞。这种方式目的细胞不与抗体结合，适合于缺乏针对目的细胞的特异性抗体的情况（某些稀有标志）。但在靶细胞的细胞数所占比例比较小时，分选过程中存在的非特异性吸附会直接导致目的细胞的损失。

（2）根据不同分选方法分类：

• 直接分选法：将抗体或亲和配体直接包被在磁性颗粒上，形成免疫磁性复合颗粒。将其与多细胞悬液混合孵育之后，目的细胞会特异性的结合在免疫磁珠上，在外加磁场的作用下，带有磁珠的目的细胞滞留在磁场中，而非目的细胞则会被去除。

• 间接分选法：目的细胞首先与对应的一抗孵育，激活细胞之后清洗去除未结合的一抗，后再加入预先包被有二抗的磁性颗粒与活化后的细胞进行孵育，一抗与二抗之间的相互作用使得磁粒结合在目的细胞上，同样在磁场作用下滞留目的细胞达到分选目的。

注意事项：确保选择的标志物适合您的研究目的，并具有足够的特异性。