小沐同学（AI）|单细胞测序100问(35)

Q：制备单细胞悬液的时候，如果出现结团现象该如何解决？

A：

首先应该先判定下出现结团现象的可能的原因，一般原因可能有以下几种情况，可以根据原因来进行针对性优化：

• 组织特性，例如血管或皮肤等样本本身容易出现细胞结团现象，可判定细胞总数和结团率，如数量足够，结团率在20%以下，可经细胞筛过滤后再进行后续处理。

• 酶解不完全，导致细胞间连接尚未分离或者；可再重新优化酶解的温度和时间等条件。

• 离心过程中速度太大或细胞悬液静置时间较长，导致的自然结团；可用无钙镁平衡盐溶液重新洗涤细胞，也可以加入适用的EDTA，但注意浓度不可超过2mM。

• 酶解过程中细胞损伤，导致DNA释放到悬液中，可能会附着到未消化的组织，影响蛋白酶的进一步消化导致结团或者附着到细胞上导致聚集成团；可少量添加DnaseⅠ，浓度不宜超过0.1 mg/mL，注意轻柔吹打细胞，从而可以消化游离DNA而不损伤完整细胞。